澳门六开彩开奖结果历史

试剂(ji)盒内(nei)容

产(chan)品说明：

        本试剂盒(he)采用(yong)碱裂解法裂解细胞(bao)，根(gen)据(ju)离心吸附柱(zhu)在高盐(yan)状态下(xia)特异性地(di)结合溶(rong)液中(zhong)的 DNA的原理特异性提(ti)取质粒DNA。离心吸(xi)附柱中采(cai)用的硅(gui)基质材料能高效、专(zhuan)一地吸(xi)附DNA，可(ke)最大(da)限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物(wu)。使用本试剂盒提(ti)取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序(xu)、连接和转化等试(shi)验。

       使用前请先在漂洗液中加入无(wu)水(shui)乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。溶液Ⅰ在(zai)使用前先加入 RNaseA(将试剂盒中提供的 RNaseA 全部加入)，混匀，置(zhi)于 2-8℃保存。如(ru)非(fei)指(zhi)明，所有(you)离心(xin)步骤均(jun)为使用台(tai)式(shi)离心(xin)机在室(shi)温下离心(xin)。

操作步(bu)骤（仅供参考）：

1、取(qu)5 mL 细菌培养物(wu)，12000 rpm离心1 min，尽(jin)量吸除上清(菌液较多时可以通过多次(ci)离心(xin)将菌体沉淀收集(ji)到一(yi)个2 mL 离心管中(zhong))。

2、向留有菌体沉淀的(de)离心管中加入  250 μL  溶液Ⅰ(请先检查是否已(yi)加(jia)入RNaseA)，使用(yong)移液器(qi)或旋涡振荡器(qi)彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意:如果菌块未彻底混(hun)匀，会影响裂解导致(zhi)质粒提(ti)取量和纯度偏(pian)低。

3、向离心管中加(jia)入(ru)250 μL溶液Ⅱ，温和地上下翻转6-8次(ci)使菌体充分裂(lie)解(jie)。注意:混匀一定要温和以免污染细菌基因组(zu)DNA，此时菌液应变得(de)清亮(liang)粘(zhan)稠，作(zuo)用时间不要(yao)超过5 min，以免质粒(li)受到(dao)破坏。

4、向离心管中加入350 μL溶液Ⅲ，立即温(wen)和地上下翻转6-8次，充(chong)分(fen)混匀，此时会(hui)出现白色絮沉(chen)淀。12000 rpm离心10 min，用(yong)移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，尽量(liang)不要(yao)吸出沉淀(dian)。注意(yi):溶(rong)液Ⅲ加入后应立即混(hun)合，避免产(chan)生局部(bu)沉(chen)淀。如果上清中还有微小白色沉(chen)淀，可再次离(li)心后取上清。

5、将(jiang)上一步所(suo)得上清液加入吸附柱中(吸附柱(zhu)加入(ru)收集管中)，空温放置2 min，12000 rpm离心1 min，倒掉收集管中的废(fei)液，将(jiang)吸附柱重新(xin)放回收集管中。

6、向吸附柱中加入500 μL漂洗液Ⅰ(使用前(qian)请先检(jian)查是否(fou)已加(jia)入无水乙(yi)醇)，12000 rpm离(li)心1 min，弃废液(ye)，将吸(xi)附柱放(fang)入(ru)收集管(guan)中。

7、向吸附柱中加入700 μL漂洗液Ⅱ(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000 rpm离心1 min，弃废(fei)液，将吸(xi)附柱放(fang)入收集管中。

8、向(xiang)吸附柱中加入700 μL漂洗液Ⅱ，12000 rpm 离心(xin)1 min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

9、12000 rpm离(li)心2 min，将(jiang)吸附柱敞口置于(yu)室(shi)温或50 ℃温(wen)箱放(fang)置(zhi)数分钟，目的是将吸(xi)附柱中残(can)余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实(shi)验(yan)如酶切、PCR等。

10、将(jiang)吸(xi)附(fu)柱放入一个干净的离心管中(zhong)，向吸(xi)附(fu)膜中(zhong)央悬(xuan)空(kong)滴加50-200 μL经(jing)65℃水浴热的洗(xi)脱(tuo)液，室温(wen)放置2 min，12000 rpm离心(xin)1 min。

11、为了增加(jia)质粒的回收效(xiao)率，可将得到的洗脱液(ye)重新加(jia)入吸(xi)附柱(zhu)中，室温放置2 min，12000 rpm离(li)心1 min。

注(zhu)意事项：

1、使用前请先检(jian)查溶(rong)液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出现混(hun)浊，如有混(hun)浊现象，可(ke)在 37℃水浴中(zhong)加热几(ji)分钟，待溶(rong)液恢复澄清后再使用。溶(rong)液Ⅱ、溶液Ⅲ、漂洗液Ⅰ和漂洗液Ⅱ使用后应立即拧紧(jin)盖子。

2、洗脱缓(huan)冲液(ye)体积不(bu)应少(shao)于(yu)100μL，体(ti)积过小影响(xiang)回收效率；洗脱液的pH值对洗脱(tuo)效(xiao)率也有影响(xiang)，若需要用水做洗脱(tuo)液应保证其pH值(zhi)在8.0左右(you)(可用(yong)NaOH将(jiang)水(shui)的pH值调至此范围)，pH值低于7.0会降低洗(xi)脱效率，DNA产物(wu)应保存在(zai)-20℃，以防 DNA 降解。

3、DNA浓度及(ji)纯(chun)度检测(ce)：得到的(de)质粒(li)DNA纯度与样品(pin)保(bao)存时(shi)间(jian)、操(cao)作过(guo)程中的剪切力等因(yin)素(su)有(you)关。得到的DNA可(ke)用琼脂糖疑胶电泳(yong)和紫(zi)外分光(guang)光(guang)度计(ji)检测浓度与(yu)纯度。DNA应(ying)在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值(zhi)为1相当(dang)于大约50ug/mL双链DNA、40ug/mL单链DNA。OD₂₆₀/OD₂₈₀比(bi)值应(ying)为1.7-1.9，如果(guo)洗脱时不使(shi)用洗脱缓(huan)冲液，而使(shi)用去(qu)离子水，比值会(hui)偏低(di)，因(yin)为pH值和离子(zi)存(cun)在会(hui)影响吸光值，但并不表示纯度低。