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产品编号：QR1015-100T
产品价格：¥ 450
产品简介：产品(pin)名称(cheng) 质粒小(xiao)量提(ti)取(qu)(qu)试(shi)剂盒(he)(he)；质粒小(xiao)提(ti)中量提(ti)取(qu)(qu)试(shi)剂盒(he)(he) 产品(pin)内(nei)容 质粒提(ti)取(qu)(qu)试(shi)剂盒(he)(he) 产品(pin)用途 质粒提(ti)取(qu)(qu) 储存(cun)条件 室温保存(cun) 保质期 1年
试剂(ji)盒内容(rong)
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试(shi)剂(ji)盒(he)组成 |
QR1015-50T |
QR1015-100T |
QR1015-200T |
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RNaseA |
400 μL |
800 μL |
1600 μL |
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溶液Ⅰ |
30 mL |
60 mL |
120 mL |
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溶液Ⅱ |
30 mL |
60 mL |
120 mL |
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溶液Ⅲ |
40 mL |
80 mL |
160 mL |
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漂洗液(ye)Ⅰ |
24 mL |
48 mL |
96 mL |
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漂洗液(ye)Ⅱ |
15 mL |
15 mL×2 |
15 mL×4 |
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洗脱(tuo)液 |
30 mL |
60 mL |
120 mL |
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吸附柱 |
50个 |
100个 |
200个(ge) |
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收集管 |
50个 |
100个 |
200个 |
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说明(ming)书(shu) |
1份 |
1份 |
1份 |
产品说明：
本试剂盒采用(yong)碱裂解法裂解细(xi)胞，根据离(li)心吸附柱在高(gao)盐状态下特异性地(di)结合溶液中的(de) DNA的原理特(te)异性(xing)提取质粒DNA。离(li)心吸(xi)附柱中采(cai)用的硅基质材料能高效、专一(yi)地吸(xi)附DNA，可最大限度去除杂质蛋(dan)白(bai)及细胞中其他有(you)机(ji)化合物。使用本试(shi)剂盒提取的质粒DNA可适用于各种(zhong)常规操作，包括(kuo)酶切、PCR、测序、连(lian)接(jie)和(he)转化等试验(yan)。
使(shi)用前请先在(zai)漂(piao)洗液中(zhong)加入无水乙醇，加入体积(ji)请参照瓶体上的标签。溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA(将试剂盒中提供的(de) RNaseA 全部(bu)加入(ru))，混匀，置于 2-8℃保存。如非(fei)指明，所有离心步骤均为使用台式(shi)离心机(ji)在室(shi)温下离心。
操作(zuo)步(bu)骤（仅供(gong)参考）：
1、取10-15mL细菌培养物(wu)，12000rpm离心1min，尽量吸除上清(可以通过(guo)多次(ci)离心将菌体沉淀收集(ji)到一个(ge)2mL 离心管中)。
2、向留(liu)有(you)菌体沉(chen)淀的离心(xin)管中(zhong)加入 500μL 溶液Ⅰ(请(qing)先(xian)检查是(shi)否已加入(ru)RNaseA)，使用(yong)移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细(xi)(xi)菌细(xi)(xi)胞(bao)沉淀。注意:如果菌块未(wei)彻底混匀，会(hui)影响裂(lie)解导致质粒(li)提取量和(he)纯度偏低。
3、向离(li)心管中(zhong)加入500μL溶液Ⅱ，温和地上下翻转6-8次使菌(jun)体(ti)充分裂解。注(zhu)意:混匀一(yi)定要(yao)温和(he)以免污染细菌基因组DNA，此时(shi)菌液(ye)应变得清(qing)亮粘稠，作用(yong)时(shi)间不要超过5min，以免质粒受(shou)到破坏。
4、向离心管(guan)中加入(ru)700μL溶液(ye)Ⅲ，立即温(wen)和地上下翻转6-8次，充(chong)分混匀，此(ci)时会出现白色絮沉淀。12000rpm离心10 min，用(yong)移液器(qi)小(xiao)心(xin)地将上清转(zhuan)移到另一个干(gan)净的离心(xin)管中，尽(jin)量不要吸出沉(chen)淀。注意:溶(rong)液Ⅲ加入(ru)后应立(li)即混合，避免产生局部沉(chen)淀(dian)。如果上清(qing)中还有(you)微小白色(se)沉(chen)淀(dian)，可再次离心后取上清。
5、将(jiang)上(shang)一步所得上(shang)清液(ye)加入(ru)吸(xi)附柱中(吸附柱(zhu)加入收集管(guan)中)，空温放置(zhi)2min，12000rpm离心1min，倒掉收集管(guan)中(zhong)(zhong)的废液，将(jiang)吸附柱重新放(fang)回收集管(guan)中(zhong)(zhong)。
6、向吸附柱(zhu)中加入500μL漂洗液Ⅰ(使用前请先检查是否已加入无水乙(yi)醇)，12000rpm离心1min，弃废(fei)液，将吸附柱放(fang)入收(shou)集管中(zhong)。
7、向(xiang)吸附柱中加入(ru)700μL漂洗液Ⅱ(使用前请(qing)先检(jian)查是否已(yi)加入(ru)无(wu)水(shui)乙(yi)醇)，12000rpm离心1min，弃(qi)废(fei)液，将吸附柱放(fang)入(ru)收集(ji)管中。
8、向吸附柱中加入700μL漂洗液Ⅱ，12000rpm 离(li)心(xin)1min，弃废液，将(jiang)吸附(fu)柱放入收集管中。
9、12000rpm离心(xin)2min，将吸附柱敞(chang)口置于室温(wen)或50℃温箱(xiang)放置数分钟，目的(de)(de)是(shi)将(jiang)吸附柱中(zhong)残余的(de)(de)漂洗(xi)液去除，否则(ze)漂洗(xi)液中(zhong)的(de)(de)乙醇会影响后(hou)续的(de)(de)实验如酶切、PCR等。
10、将吸(xi)附(fu)(fu)柱放入(ru)一个(ge)干净的离(li)心管中，向吸(xi)附(fu)(fu)膜中央悬空滴加100-300μL经65℃水浴(yu)热的洗脱液，室温放置2min，12000rpm离心1min。
11、为了增加(jia)质粒的回收效率(lv)，可将(jiang)得到的洗脱液重新加(jia)入吸附柱(zhu)中，室(shi)温放置2min，12000rpm离心1min。
注意(yi)事(shi)项：
1、使(shi)用前(qian)请先检查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是(shi)否出现混浊，如有混浊现象，可(ke)在 37℃水浴中加热几分钟，待溶(rong)液恢复(fu)澄(cheng)清(qing)后再使(shi)用。溶(rong)液Ⅱ、溶液(ye)Ⅲ、漂洗液Ⅰ和漂洗液(ye)Ⅱ使用后应立(li)即拧(ning)紧盖子。
2、洗(xi)脱(tuo)缓冲液体积(ji)不(bu)应(ying)少于100μL，体(ti)积过小影响回收效(xiao)率；洗脱(tuo)液的pH值对洗(xi)脱效率(lv)也(ye)有影(ying)响(xiang)，若需要用水(shui)做洗(xi)脱液(ye)应保证其pH值(zhi)在8.0左右(可用NaOH将水的(de)pH值调至此(ci)范围)，pH值低于(yu)7.0会降低洗(xi)脱效率，DNA产(chan)物应(ying)保存在-20℃，以(yi)防 DNA 降解。
3、DNA浓度(du)(du)及(ji)纯(chun)度(du)(du)检测(ce)：得到的质(zhi)粒DNA纯度与样品(pin)保存时(shi)间、操作过程中的剪(jian)切力等因素(su)有关。得到的DNA可用琼脂糖疑胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯(chun)度。DNA应在OD260处(chu)有显(xian)著吸收峰，OD260值(zhi)为1相当于大约(yue)50ug/mL双链DNA、40ug/mL单链DNA。OD260/OD280比(bi)值(zhi)应为1.7-1.9，如果(guo)洗(xi)(xi)脱(tuo)时不使用洗(xi)(xi)脱(tuo)缓(huan)冲液，而使用去离子水，比(bi)值会(hui)偏(pian)低，因为pH值和离子存在会影响吸光(guang)值，但并不表示纯度低。