质粒小提中量提取试剂盒

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质粒小提中量提取试剂盒

产品编号：QR1015-50T

产品价格：¥ 240

产品简介：产(chan)品名称质(zhi)(zhi)粒(li)小量(liang)提取试剂盒；质(zhi)(zhi)粒(li)小提中量(liang)提取试剂盒产(chan)品内容质(zhi)(zhi)粒(li)提取试剂盒产(chan)品用途质(zhi)(zhi)粒(li)提取储存条件室温(wen)保(bao)存保(bao)质(zhi)(zhi)期 1年(nian)

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试剂盒内(nei)容

试剂盒组(zu)成	QR1015-50T	QR1015-100T	QR1015-200T
RNaseA	400 μL	800 μL	1600 μL
溶液Ⅰ	30 mL	60 mL	120 mL
溶(rong)液Ⅱ	30 mL	60 mL	120 mL
溶液Ⅲ	40 mL	80 mL	160 mL
漂洗(xi)液Ⅰ	24 mL	48 mL	96 mL
漂洗液Ⅱ	15 mL	15 mL×2	15 mL×4
洗(xi)脱液(ye)	30 mL	60 mL	120 mL
吸附柱	50个	100个	200个
收集管	50个	100个	200个
说(shuo)明书	1份	1份	1份

产品(pin)说(shuo)明：

本(ben)试剂(ji)盒采用碱裂解法裂解细胞，根(gen)据离心吸(xi)附柱(zhu)在高盐状(zhuang)态下特异性地结合溶(rong)液中的 DNA的原理特异性提取质粒DNA。离心吸附(fu)柱(zhu)中采用(yong)的硅基质(zhi)材料能高效、专一地吸附(fu)DNA，可最大(da)限度去(qu)除杂质(zhi)蛋(dan)白及细胞中其他有机化合物(wu)。使用本试剂盒提取的(de)质(zhi)粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。

使用前(qian)请先在漂(piao)洗液中加入(ru)无水乙醇，加入(ru)体(ti)积(ji)请参照瓶(ping)体(ti)上的标签(qian)。溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA(将试剂盒中提(ti)供的 RNaseA 全部加入)，混匀，置于 2-8℃保(bao)存。如非(fei)指(zhi)明，所(suo)有离(li)心步骤均为使用台式离(li)心机在室温下(xia)离(li)心。

操作步骤（仅(jin)供参考）：

1、取10-15mL细菌培养(yang)物，12000rpm离(li)心(xin)1min，尽量(liang)吸(xi)除(chu)上清(可以通过多次(ci)离心(xin)将菌体沉淀收集到(dao)一个2mL 离心(xin)管中)。

2、向留有菌(jun)体(ti)沉淀(dian)的离心管中加入 500μL 溶(rong)液Ⅰ(请先检查是(shi)否已(yi)加入(ru)RNaseA)，使用移液(ye)器或(huo)旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意(yi):如(ru)果菌块未(wei)彻(che)底混匀(yun)，会(hui)影(ying)响裂解导致(zhi)质粒(li)提取量和纯度偏低。

3、向离心管(guan)中加入500μL溶液Ⅱ，温(wen)和地上(shang)下翻转6-8次使菌体充分裂解。注意:混匀一(yi)定要(yao)温(wen)和以免污染细菌(jun)基因(yin)组(zu)DNA，此时(shi)菌(jun)液应变得(de)清亮粘稠，作用时(shi)间不要超过5min，以免质粒受到破坏。

4、向离心(xin)管中加(jia)入(ru)700μL溶液(ye)Ⅲ，立即(ji)温(wen)和地上下翻转6-8次，充(chong)分(fen)混匀，此时(shi)会出现白色絮沉淀。12000rpm离心10 min，用移液器小心(xin)地将(jiang)上(shang)清转移到另(ling)一(yi)个(ge)干(gan)净的离心(xin)管中，尽量(liang)不要(yao)吸出沉(chen)淀。注意(yi):溶液(ye)Ⅲ加入后应立即混合，避免产生局(ju)部沉(chen)淀(dian)。如果上清中还有微(wei)小白色沉(chen)淀(dian)，可再次(ci)离心后取上(shang)清(qing)。

5、将上一步(bu)所得(de)上清液加入吸附柱(zhu)中(zhong)(吸(xi)附柱加入收(shou)集管中)，空温放置2min，12000rpm离(li)心1min，倒掉收集管中(zhong)的(de)废液(ye)，将吸附柱(zhu)重新(xin)放回(hui)收集管中(zhong)。

6、向吸附柱中加(jia)入500μL漂洗液Ⅰ(使用前请先检查是否已加入无水(shui)乙醇)，12000rpm离(li)心1min，弃(qi)废液，将(jiang)吸附柱放入(ru)收集(ji)管中。

7、向吸附柱中加(jia)入700μL漂洗液Ⅱ(使用前请先检查是否已(yi)加入无(wu)水乙醇)，12000rpm离心(xin)1min，弃废液(ye)，将吸附柱放(fang)入收集管(guan)中。

8、向吸附(fu)柱中加入700μL漂洗液Ⅱ，12000rpm 离心1min，弃废液，将吸附柱(zhu)放入收集管中。

9、12000rpm离心(xin)2min，将吸(xi)附柱敞口置于室(shi)温或50℃温箱放置数(shu)分钟，目的(de)(de)是(shi)将吸附柱中残余的(de)(de)漂洗液去除(chu)，否则漂洗液中的(de)(de)乙(yi)醇会影响后(hou)续的(de)(de)实验如酶切、PCR等。

10、将吸附柱放入一个干(gan)净的(de)离心管(guan)中(zhong)，向吸附膜中(zhong)央悬空滴加100-300μL经65℃水浴(yu)热的洗脱液，室温放置2min，12000rpm离心(xin)1min。

11、为(wei)了增加(jia)质粒的(de)回(hui)收效(xiao)率，可将得到(dao)的(de)洗脱液重新加(jia)入吸附柱(zhu)中，室温(wen)放(fang)置2min，12000rpm离心1min。

注意(yi)事项(xiang)：

1、使(shi)用前请先检查溶液Ⅱ和(he)溶液Ⅲ是否出现混(hun)浊(zhuo)，如有混(hun)浊(zhuo)现象(xiang)，可(ke)在 37℃水(shui)浴中加热(re)几(ji)分钟，待溶(rong)液(ye)恢复澄清后再(zai)使用(yong)。溶(rong)液(ye)Ⅱ、溶液(ye)Ⅲ、漂洗液(ye)Ⅰ和漂洗液Ⅱ使用后应立(li)即拧紧盖(gai)子。

2、洗(xi)脱(tuo)缓冲液体积不应(ying)少于100μL，体积过小影响回收效率；洗脱液(ye)的(de)pH值(zhi)对洗(xi)脱(tuo)效率也有影响，若需要用水做洗(xi)脱(tuo)液应保证其pH值(zhi)在8.0左右(可用NaOH将水的(de)pH值调(diao)至此范围)，pH值低于7.0会降(jiang)低洗脱效率(lv)，DNA产(chan)物应(ying)保存在-20℃，以防(fang) DNA 降解。

3、DNA浓度及纯度检测(ce)：得到的质粒DNA纯度与样(yang)品保存时间、操作过程中的(de)(de)剪切(qie)力等因(yin)素(su)有(you)关。得到的(de)(de)DNA可用琼脂糖疑胶电泳和紫外分光光度计检(jian)测浓(nong)度与纯度。DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰(feng)，OD₂₆₀值为1相(xiang)当于大约50ug/mL双链DNA、40ug/mL单(dan)链(lian)DNA。OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果(guo)洗脱(tuo)时(shi)不(bu)使用洗脱(tuo)缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值(zhi)和离(li)子存在会影响吸光值(zhi)，但(dan)并不表示纯(chun)度低(di)。