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产品编(bian)号：QR1017

制品(pin)内容(rong)

产品简介

本产品 GeL & PCR Purification Kit 既适用于从普通或低熔(rong)点琼脂糖凝(ning)胶中回收DNA 片段，也可用(yong)于 P°CR 产物或(huo)酶切产物中 DNA 片段的纯化，能够有效去除蛋白质、有机化合(he)物、无机盐离子(zi)及寡(gua)核昔酸引物等(deng)杂质。该试(shi)剂盒适(shi)用(yong)于 100 bp~30 kb 大小DNA片段的回收，回收率高达 80% 以上，每(mei)个(ge)离心(xin)吸(xi)附柱(zhu)每(mei)次可吸(xi)附的 DNA 量约为 10 g,洗脱体积不低于 30 μL。该(gai)试剂盒纯化回(hui)收的(de) DNA 纯度高，完整(zheng)性好，下游可用于(yu)酶切、PCR、测序、文库(ku)筛选(xuan)、连接和转化等实验。

保存： 室(shi)温保存

使用(yong)方法

琼脂糖凝胶回(hui)收

(1). 使用前请先确认 Buffer PW 中已经(jing)加入相应体积的(de)无水乙醇

(2). 将目的 DNA 条(tiao)带从琼(qiong)脂糖凝胶中(zhong)切(qie)下 (尽量切除多余凝胶)，放入干净的离心管(自(zi)备)中，称量计(ji)算凝胶重量(提前记录离心管重(zhong)量(liang)并扣除)。注(zhu)意：较(jiao)大的胶块可以(yi)切碎，以(yi)保(bao)证溶胶效果(guo)。

(3). 向(xiang)凝(ning)胶中加入(ru) 3 倍(bei)体积的溶胶(jiao)液 Buffer PN (凝胶(jiao)体积的计(ji)算方(fang)法(fa)举例(li)：若凝胶(jiao)的重量为 100 mg，其体积(ji)可视(shi)为 100 μL（以(yi)此类推(tui)）;置(zhi)于65 ℃温育，期间(jian)每(mei)隔2~3 min 温和地上下(xia)颠倒离(li)心管(guan)，以(yi)确(que)保胶块完全溶解。

(4). 待上述溶胶液温(wen)度(du)降至(zhi)室温(wen)后(hou)再加(jia)入到(dao)吸附柱(zhu)中，室温(wen)放置 2 min，12000 rpm 离心1 min，倒掉收集(ji)管中(zhong)的废液，将吸附柱重新(xin)放入收集(ji)管中(zhong)。

注意 1: 当回收(shou)片(pian)段(duan)< 500 bp 时，溶胶液转移到吸(xi)附柱前需要先加入 1 倍胶体积的异丙(bing)醇，上下(xia)颠倒混匀。

注(zhu)意 2: 吸(xi)附柱(zhu)的(de)容积为(wei) 800 μL，若体(ti)积大(da)于 800 μL 可分批加入。

(5). 向吸附柱中加入600 μL漂洗液 Buffer PW (确(que)认已经加入(ru)无水乙醇) ，12000 rpm 离心1 min，倒掉收(shou)集(ji)管中的废液，将吸附柱重新放入收(shou)集(ji)管中。注意:如果回收的 DNA 下游是用(yong)于盐感(gan)的实验（例如(ru): 平末端(duan)连接或直接测序）建议加(jia)入漂洗(xi)液(ye)后(hou)静置 2~5 min 再(zai)离心。

(6). 重复步骤（5）。

(7). 将吸附柱放入收集管中，12000 rpm 离心1 min 去除残留的漂洗液，将吸附柱(zhu)室温放(fang)置2~5 min，保证(zheng)乙醇彻底挥(hui)发。

注意: 漂洗液中(zhong)残留(liu)的乙醇会影(ying)响后续的酶反应实验。

(8). 将吸附柱(zhu)放到新的(de) 1.5 mL 离心管中(zhong)，向吸附膜中(zhong)间悬空(kong)加入(ru) 30~50 μL 洗脱液 Buffer EB，室温放(fang)置 2 min，12000 rpm 离心(xin)1 min。收集到的即为 DNA 溶液，可立(li)即使用或置于 -20°°C保存。

注意 1: 洗脱液(ye) EB 的体积不应少于 30 μL，体积过少会(hui)影响回收的效(xiao)率。

注意 2: 将洗脱液 EB 加热至 65°C再洗(xi)脱，可明(ming)显提高回收效率。

PCR 产物或酶切产物回(hui)收(shou)

（1） 使用前请先确认 Buffer PW 中已经加入相应体积(ji)的无水乙(yi)醇

（2） 根据(ju) P°CR 反应液或酶切反应液体积，向其中加(jia)入3 倍体(ti)积的 Buffer PN，充分(fen)混(hun)匀。

（3） 将上述溶液加入到(dao)吸附(fu)柱中(zhong)，室温放置(zhi) 2 min，12000 rpm 离心 1 min，倒掉收集(ji)管中的废液(ye)，将吸(xi)附(fu)柱重新放入收集(ji)管中。

注意 1: 当回收片段< 500 bp 时,上述溶液(ye)转移到吸附柱前需(xu)要先加(jia)入1倍样品(pin)体(ti)积的(de)异(yi)丙醇(chun),上下颠(dian)倒混匀。

注意 2: 吸附(fu)柱的容积为 800 μL，若体积大于(yu) 800 pL 可分批(pi)加入。

（4） 向吸(xi)附柱中加入 600 μL 漂洗(xi)液(ye) Buffer Pw (确认已经加入无水乙醇(chun)) ，12000 rpm 离心1 min，倒(dao)掉(diao)收集管中的(de)废液(ye)，将吸附柱(zhu)重新(xin)放入收集管中。个注:如果(guo)回(hui)收(shou)的 DNA 下游是用(yong)于盐敏感(gan)的实验(例如(ru): 平末(mo)端连接或直接测序) ，建议加入漂洗液后静置 2~5 min 再离心(xin)